如何使用细胞培养基以及保存注意事项

细胞培养基的使用方法：
1、称取本品23.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、样品的稀释及处理，略。
3、根据商检的标准要求或对标本污染情况的估计，细胞培养基选择2—3个稀释度，分别在10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
4、稀释液移入平皿后，应及时将凉至45℃的琼脂培养基(可放置于45℃水浴箱保温)注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
5、待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。
6、观察结果并进行计数。25-250个菌落为合适范围。

细胞培养基保存注意事项：
1、需要长期保存的细胞培养基必须储存于-20℃ - 兔血清-70℃ 低温冰箱中，4℃冰箱中保存时间切勿超过1月，由于细胞培养基结冰时体积会增加约10%，因此，细胞培养基在冻入低温冰箱，必须预留定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
2、瓶装细胞培养基解冻需采用逐步解冻法：-20℃ 至 -70℃ 细胞培养基低温冰箱中的细胞培养基放入4℃冰箱中溶解1天，然后移入室温，待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与兔血清成分均一，减少沉淀的发生。切勿直接将细胞培养基从-20℃进入37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。

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