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如何提高ELISA的精确重现性——江蓝纯为您解答
人阅读 发布时间：2022-04-28 09:28
如何提高ELISA的精确重现性
免疫检测法的精确性表现为单次实验孔间（批内）的重复性和多次实验之间（批间）的重复性，CV值高则表明精确度低，通常由以下两个原因造成：移液技术和洗涤技术。
移液技术
1. 移液时，枪头应对准孔中央，避免接触孔壁及底部。
2. 移液后轻轻晃动混匀试剂。
3. 如果您的样品具有黏性，请预先润洗枪头以消除表面张力的影响，吸液时等待片刻使体积平衡后再取出。
4. 移液不充分或移液体积不均，说明移液器需要校正，必要时请检查移液器并重新校正。
5. 加样时，不同的试剂标准品和样本间都要确保更换枪头，避免交叉污染。
6. 确保使用合适的枪头，不合适的枪头无法正确量取吸液和加样的体积。
洗涤技术
1. 如果使用自动洗板机或多通道移液器，请确保进出口能正常运作。
2. 最后一次洗涤后，翻转酶标板倒出多余的洗涤液，并在吸水纸上拍干液体，洗板太快或太慢都会降低精确度，不能让孔内液体自然风干，需立即进行下一步操作。
3. 按照说明书，添加足量的洗涤液至孔内，并保证洗涤完全。
4. 由于洗涤液不是通用的，当试剂盒内的洗涤液用完时，请不要使用其他试剂盒中的洗涤液，如有需要，可联系技术支持寻求帮助。
5. 不要减少或增加洗涤时的浸泡时间或跳过浸泡的步骤。
6. 按照说明书上推荐的洗涤次数清洗，随意改变洗涤的次数会影响实验的精确性。
贮液瓶
为避免污染，不同的试剂使用不同的贮液瓶，一些试剂或样本很容易被污染（比如唾液、氧化剂等），请参考说明书操作，必要时候采取一些预防措施保护溶液，另外，要保证盛放试剂或洗液的加样槽的清洁度，避免造成污染。
封板覆膜
使用过的封板覆膜可能含有上一步实验残留的试剂，如果重复使用会造成孔板污染，从而导致精确性低，建议每一次孵育使用新的封板覆膜。
免疫检测法的精确性表现为单次实验孔间（批内）的重复性和多次实验之间（批间）的重复性，CV值高则表明精确度低，通常由以下两个原因造成：移液技术和洗涤技术。
移液技术
1. 移液时，枪头应对准孔中央，避免接触孔壁及底部。
2. 移液后轻轻晃动混匀试剂。
3. 如果您的样品具有黏性，请预先润洗枪头以消除表面张力的影响，吸液时等待片刻使体积平衡后再取出。
4. 移液不充分或移液体积不均，说明移液器需要校正，必要时请检查移液器并重新校正。
5. 加样时，不同的试剂标准品和样本间都要确保更换枪头，避免交叉污染。
6. 确保使用合适的枪头，不合适的枪头无法正确量取吸液和加样的体积。
洗涤技术
1. 如果使用自动洗板机或多通道移液器，请确保进出口能正常运作。
2. 最后一次洗涤后，翻转酶标板倒出多余的洗涤液，并在吸水纸上拍干液体，洗板太快或太慢都会降低精确度，不能让孔内液体自然风干，需立即进行下一步操作。
3. 按照说明书，添加足量的洗涤液至孔内，并保证洗涤完全。
4. 由于洗涤液不是通用的，当试剂盒内的洗涤液用完时，请不要使用其他试剂盒中的洗涤液，如有需要，可联系技术支持寻求帮助。
5. 不要减少或增加洗涤时的浸泡时间或跳过浸泡的步骤。
6. 按照说明书上推荐的洗涤次数清洗，随意改变洗涤的次数会影响实验的精确性。
贮液瓶
为避免污染，不同的试剂使用不同的贮液瓶，一些试剂或样本很容易被污染（比如唾液、氧化剂等），请参考说明书操作，必要时候采取一些预防措施保护溶液，另外，要保证盛放试剂或洗液的加样槽的清洁度，避免造成污染。
封板覆膜
使用过的封板覆膜可能含有上一步实验残留的试剂，如果重复使用会造成孔板污染，从而导致精确性低，建议每一次孵育使用新的封板覆膜。
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