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ELISA实验怎样正确溶解、稀释标准品

发布时间:2020-01-10 10:56 |  点击次数:

ELISA标准曲线是结果计算的尺子,标准品是ELISA实验成功与否的关键点。怎样正确溶解、稀释标准品呢?

1. 粉末标准品短暂离心,让因运输沾到管盖、管壁的标准品沉到管底。
2. 根据瓶标签加入一定体积的蒸馏水,加水后轻柔涡旋震荡,室温静置溶解 10-30min,让粉末完全溶解。
注意:加水后暂不用移液枪吹吸,避免蛋白未溶解,枪头带出部分蛋白,待完全溶解后可吹吸或涡旋振荡混匀。
3. 标准品梯度稀释
(1)标准品稀释液的选择:
若血清、血浆、组织匀浆样本,用试剂盒中的标准品稀释液,梯度稀释标准品。
若细胞上清样本,建议用细胞培养基梯度稀释标准品。
(2)耗材准备:准备8个1.5Ml离心管,写上S1-S7、空白。
(3)梯度稀释:根据说明书,每管加入等体积的标准品稀释液(培养基)。吸取同体积溶解好的标准品到S1管中,吹打10次混匀,涡旋5S。从S1管中吸取同体积溶液到 S2管,吹打10次混匀,涡旋5s。同法稀释S3-S7浓度。
(4)空白: 标准品稀释液(培养基)作为空白即零浓度。
注意:梯度稀释标准品时,涡旋震荡混匀后可短暂离心,让到盖子、壁上的液体到管底,再开始稀释下个浓度。
                      
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