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技术资料/正文
牛Ⅲ型前胶原羧基端原肽(PIIICP)试剂盒使用说明书
183 人阅读发布时间：2023-10-20 09:20
牛Ⅲ型前胶原羧基端原肽(PIIICP)试剂盒
本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中牛Ⅲ型前胶原羧基端原肽(PIIICP)的含量。
有效期：6个月
保存条件：2-8℃
试剂盒组成：
备注：
1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。
2. 标准品浓度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL
3. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
检测前准备工作：
1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2.从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象；放置室温，轻摇均匀，待结晶完全溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液，未用完的放回4℃
3.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
实验原理：
牛Ⅲ型前胶原羧基端原肽(PIIICP)试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被牛Ⅲ型前胶原羧基端原肽(PIIICP)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的牛Ⅲ型前胶原羧基端原肽(PIIICP)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
实验所需自备试验器材：
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
样本处理及要求：
1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4.细胞培养物上清：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。
7.样品保存：样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中牛Ⅲ型前胶原羧基端原肽(PIIICP)的含量。
有效期：6个月
保存条件：2-8℃
试剂盒组成：
备注：
1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。
2. 标准品浓度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL
3. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
检测前准备工作：
1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2.从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象；放置室温，轻摇均匀，待结晶完全溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液，未用完的放回4℃
3.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
实验原理：
牛Ⅲ型前胶原羧基端原肽(PIIICP)试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被牛Ⅲ型前胶原羧基端原肽(PIIICP)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的牛Ⅲ型前胶原羧基端原肽(PIIICP)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
实验所需自备试验器材：
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
样本处理及要求：
1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4.细胞培养物上清：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
6.样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。
7.样品保存：样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。