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大鼠3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)试剂盒使用说明书

73 人阅读发布时间:2023-05-19 09:01

大鼠3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)试剂盒
本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中大鼠3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)的含量。
有效期:6个月
保存条件:2-8℃
试剂盒组成:

备注:
1.(96T/48T)打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。
2. 标准品浓度依次为:800、400、200、100、50、25 pg/mL
3. 经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
检测前准备工作:
1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。
2.从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象;放置室温,轻摇均匀,待结晶完全溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液,未用完的放回4℃
3.20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
实验原理:
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
实验所需自备试验器材:
1.酶标仪(450nm)
2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
大鼠3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)试剂盒样本处理及要求:
1.血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2.血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4.细胞培养物上清:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
5.其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测。
6.样品外观:样品应清澈透明,悬浮物应离心去除。
7.样品保存:样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

资料格式:

大鼠3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)ELISA试剂盒.doc

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